세포 배양 기본 지식 (기기편) – 2

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안녕하세요! 오늘은 세포 배양 기본 지식 기기편 두 번째 내용으로 찾아왔습니다.

저번에 말씀드렸다시피 오늘은 incubator와 현미경 관련된 정보를 알려드리겠습니다.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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  CO2 Incubator

실험실에서 세포를 배양할 때 CO2 incubator에 세포를 넣어 배양을 합니다. incubator는 세포의 배양을 위하여 일정한 온도와 CO2 의 조절 등을 통해 최적의 환경을 유지를 하여야 합니다. 실험에서 많이 사용되는 incubator는 CO2를 5%~10%로 맞춘 CO2 incubator를 사용합니다.

pH를 확인할 수 있는 phenol red 성분이 포함된 media를 CO2 incubator에서 사용하게 되면 pH에 따라 media의 색이 변하게 됩니다.
산성이 높아질 경우, 오렌지 색으로 바뀌며, 알칼리성이 높아질 경우, 붉은 빛으로 변하게 됩니다.
CO2의 농도에 따라 media의 pH에 영향을 줄 수 있습니다.

일반적으로 media의 성분에는 탄산수소나트륨 (Sodium bicarbonate)가 포함되어 있어 완충 역할을 해줌과 동시에 CO2와 상호작용하여 media의 pH를 적절하게 맞추어 주는 역할도 하게 됩니다. 그리고 삼투압을 유지시켜 주며, 에너지원을 제공하는 역할도 합니다.
하지만, 탄산수소나트륨은 37℃에서 pH7 ~ 7.5 범위에서 최적의 완충 작용을 하는 것은 아니며 5~10% CO2 / 90~95% air의 특수한 환경을 필요로 한다는 단점이 있습니다.
따라서, 탄산수소나트륨이 포함된 media를 사용하여 세포를 배양할 경우에는 CO2 incubator를 사용하여 media의 pH도 맞추어 주어 배양을 해야 합니다.

탄산수소나트륨을 대체해야 할 경우, HEPES buffer를 사용하기도 하는데 이 buffer는 37℃dptj pKa7.31을 가지고 있고 세포막을 통과하지 않아 세포 배양 media에 최적합니다.
하지만, HEPES buffer의 경우, media에 첨가하여 사용하게 되면 삼투압을 맞추어 주기 위해 NaCl의 농도를 낮추어 주어야 합니다.

또한, 세포는 온도와 습도에 매우 민감하기 때문에 incubator 내부의 공기 순환이 잘 되어 구역별 온도와 습도, CO2의 차이가 크지 않아야 합니다.

incubator의 내부를 정기적으로 소독하여 청소하며 오염에 최소화 될 수 있도록 노력해야 합니다.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

• 도립 현미경

눈으로 볼 수 없는 세포를 보기 위해서는 현미경이 필요한데 세포 배양에서는 필수라고 할 수 있습니다.
많은 현미경 종류 중에서 도립 현미경을 보통 사용하게 됩니다.

도립 현미경이란, 보통 현미경과는 반대로 시료대 상부에 있는 광원에서 하향으로 빛을 조사하여 하부에서 대물렌즈로 상을 포착하고 프리즘에 의해 굴절시켜 앞부분의 접안경에서 관찰할 수 있도록 제작된 현미경. 용기의 저면에 부착되어 증식하고 있는 배양세포 등의 형태나 기능을 산채로 관찰할 수 있다고 합니다.

 

오늘은 CO2 incubator와 도립 현미경에 대해 설명을 해드렸습니다.

더욱 많은 기기 정보와 세포 배양에 관련된 시약, 노하우를 알려 드릴 것이니, 많은 참고 부탁드리겠습니다!!

감사합니다!

 

–  참고 : 세포 배양 기본 지식 (기기편) – 1 : 세포 배양 기본 지식 (기기편) – 1